離心技術(shù)是現(xiàn)代生物化學(xué)、細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中最常用的物理分離方法之一。
賽默飛高速冷凍離心機(jī) Legend Micro 17R 作為一款高精度臺(tái)式離心設(shè)備,利用高速旋轉(zhuǎn)產(chǎn)生的強(qiáng)大離心力,將樣品中不同密度、不同粒徑的顆粒分離出來(lái)。
其獨(dú)特之處在于:高速、高效、控溫精準(zhǔn),并能保持樣品在低溫環(huán)境下穩(wěn)定不變性。
理解 Legend Micro 17R 的離心原理,有助于操作者正確設(shè)定參數(shù)、提高分離效率、延長(zhǎng)儀器壽命,并確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
當(dāng)物體繞固定軸旋轉(zhuǎn)時(shí),受到兩個(gè)相反方向的力作用:
向心力(Fc):指向旋轉(zhuǎn)中心,使物體保持圓周運(yùn)動(dòng)。
離心力(F):相對(duì)于旋轉(zhuǎn)參考系表現(xiàn)為指向外的慣性力,數(shù)值等于向心力。
離心力的數(shù)學(xué)表達(dá)式為:
F = m × ω2 × r
其中:
m 為顆粒質(zhì)量(kg);
ω 為角速度(rad/s);
r 為顆粒距旋轉(zhuǎn)中心的半徑(m)。
當(dāng)離心機(jī)以高速運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí),不同密度和質(zhì)量的顆粒受到不同大小的離心力,從而沿半徑方向發(fā)生分離。
為了統(tǒng)一表示不同設(shè)備下的離心效果,引入了相對(duì)離心力(Relative Centrifugal Force, RCF)概念:
RCF = 1.118 × 10?? × r × (RPM)2
其中:
r:轉(zhuǎn)子半徑(cm)
RPM:每分鐘轉(zhuǎn)速
RCF 越大,顆粒沉降越快。
Legend Micro 17R 最大轉(zhuǎn)速可達(dá) 17,000 rpm,對(duì)應(yīng)最大 RCF 約 25,000 × g,可實(shí)現(xiàn)細(xì)胞器、核酸、蛋白復(fù)合物等微粒級(jí)分離。
離心分離本質(zhì)上是顆粒在流體中受力運(yùn)動(dòng)的過(guò)程。
顆粒在離心場(chǎng)中受到三種主要作用力:
離心力 F? = m ω2 r
?推動(dòng)顆粒向外沉降;
浮力 F? = V ρ? ω2 r
?流體對(duì)顆粒產(chǎn)生的反向作用,取決于溶液密度 ρ?;
阻力 F? = 6 π η r? v
?顆粒在流體中移動(dòng)時(shí)受到的黏滯阻力,取決于流體黏度 η、顆粒半徑 r? 及速度 v。
顆粒達(dá)到平衡速度時(shí),三種力相互平衡:
m ω2 r – V ρ? ω2 r – 6 π η r? v = 0
此時(shí)沉降速度 v 即為穩(wěn)定速度。由此可見(jiàn),顆粒沉降速度取決于顆粒尺寸、密度差、液體黏度與離心力強(qiáng)度。
最基礎(chǔ)的離心方式,通過(guò)逐級(jí)提高轉(zhuǎn)速和時(shí)間,使樣品中顆粒按大小和密度依次沉降。
常用于分離:
細(xì)胞核(低速 1,000 × g);
線粒體(中速 10,000 × g);
核糖體、病毒顆粒(高速 20,000 × g 以上)。
Legend Micro 17R 可在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)多級(jí)速度調(diào)控,適合差速分離實(shí)驗(yàn)。
在離心管中建立密度梯度介質(zhì)(如蔗糖、CsCl),顆粒在離心力作用下移動(dòng)到與自身密度相等的位置。
用于分離:
DNA 亞型;
蛋白質(zhì)復(fù)合物;
亞細(xì)胞組分。
樣品加載于梯度上層,離心后不同顆粒按沉降速率形成清晰區(qū)帶,不發(fā)生再混合。
適合分析性分離,常用于樣品純度檢測(cè)。
設(shè)備采用無(wú)刷感應(yīng)電機(jī)(Brushless Induction Motor),特點(diǎn)如下:
啟動(dòng)平穩(wěn)、噪音低;
無(wú)碳刷磨損,免維護(hù);
電機(jī)響應(yīng)快,轉(zhuǎn)速控制精度高(誤差 ≤ ±10 rpm)。
內(nèi)置閉環(huán)速度反饋控制系統(tǒng),通過(guò)光電傳感器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)速并自動(dòng)調(diào)整電流,實(shí)現(xiàn)恒速運(yùn)行。
Legend Micro 17R 配備固定角轉(zhuǎn)子(Fixed-Angle Rotor),角度 25°–45°。
在離心過(guò)程中,顆粒沿管壁下滑至底部。
角度設(shè)計(jì)保證沉淀層緊密、沉降路徑短,分離效率高。
轉(zhuǎn)子材料為高強(qiáng)度陽(yáng)極氧化鋁合金,兼顧輕量與強(qiáng)度,可承受高離心應(yīng)力。
高速旋轉(zhuǎn)會(huì)產(chǎn)生大量熱量,溫度升高將影響生物樣品穩(wěn)定性。
Legend Micro 17R 采用無(wú)氟壓縮機(jī)制冷系統(tǒng),配合溫度傳感器與PID 反饋控制,實(shí)現(xiàn) ?9 ℃ 至 +40 ℃ 范圍內(nèi)的恒溫控制。
低溫環(huán)境下,樣品分離更加穩(wěn)定,避免酶活性喪失或蛋白降解。
顆粒在離心場(chǎng)中達(dá)到穩(wěn)定后,其沉降速度 v 可表示為:
v = (2 r?2 (ρ? – ρ?) ω2 r) / (9 η)
式中:
ρ?:顆粒密度;
ρ?:溶液密度;
η:溶液黏度。
由此可見(jiàn),沉降速度與顆粒半徑平方成正比,與介質(zhì)黏度成反比。
因此,較大顆?;蚋呙芏阮w粒會(huì)更快沉降。
固定角轉(zhuǎn)子中,顆粒沿斜面滑向底部,路徑短、沉降快。
離心時(shí)間 t 與沉降路徑 l 和速度 v 關(guān)系為:
t = l / v
通過(guò)調(diào)整轉(zhuǎn)速和時(shí)間,可控制顆粒是否完全沉降或保持懸浮。
溫度升高會(huì)降低溶液黏度,使沉降速度加快,但可能損害生物樣品活性。
Legend Micro 17R 的控溫系統(tǒng)通過(guò)快速制冷與恒溫調(diào)節(jié),確保溫度波動(dòng)不超過(guò) ±1 ℃,在保持分離效率的同時(shí)保護(hù)樣品穩(wěn)定性。
高速離心設(shè)備中,平衡原理直接關(guān)系到機(jī)械安全。
對(duì)稱(chēng)性平衡:轉(zhuǎn)子上各管孔需相對(duì)對(duì)稱(chēng)、質(zhì)量相等,防止偏心振動(dòng)。
動(dòng)態(tài)平衡檢測(cè):Legend Micro 17R 內(nèi)置振動(dòng)傳感器,檢測(cè)轉(zhuǎn)子運(yùn)行時(shí)的偏移量。
?一旦偏差超過(guò)允許范圍,系統(tǒng)立即停機(jī),防止電機(jī)損壞。
蓋鎖保護(hù)機(jī)制:電控蓋鎖系統(tǒng)在運(yùn)行期間自動(dòng)鎖緊,防止腔蓋飛開(kāi)。
這些安全設(shè)計(jì)確保在 17,000 rpm 高速狀態(tài)下設(shè)備依然平穩(wěn)運(yùn)行。
在離心管中,液體不同位置離心力并不相等。距離轉(zhuǎn)軸越遠(yuǎn),離心力越大。
這種離心力梯度形成不同的密度層:
重組分迅速沉降到底部;
輕組分停留在上層;
中間形成過(guò)渡區(qū)。
樣品分層的清晰程度取決于:
轉(zhuǎn)速與時(shí)間;
樣品密度差;
轉(zhuǎn)子角度;
溫度與溶液黏度。
Legend Micro 17R 通過(guò)高精度速度控制,使分層界面銳利、沉淀緊密。
| 因素 | 影響說(shuō)明 | 控制方式 |
|---|---|---|
| 轉(zhuǎn)速 | 決定離心力大小 | 根據(jù)樣品類(lèi)型選擇合適 RCF |
| 離心時(shí)間 | 影響沉降完全程度 | 過(guò)短分離不完全,過(guò)長(zhǎng)樣品過(guò)壓 |
| 溫度 | 影響?zhàn)ざ扰c樣品穩(wěn)定性 | 控溫在 4 ℃ 左右 |
| 樣品密度 | 決定沉降速率 | 使用密度梯度介質(zhì)調(diào)整 |
| 轉(zhuǎn)子角度 | 決定沉降路徑 | 固定角轉(zhuǎn)子適合高速沉降 |
預(yù)冷轉(zhuǎn)子,降低熱量干擾;
嚴(yán)格平衡樣品,減少能量損失;
根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)選擇最優(yōu) RCF 與時(shí)間組合。
通過(guò)分級(jí)轉(zhuǎn)速離心實(shí)現(xiàn)細(xì)胞核、線粒體、微粒體的順序沉降。
原理依據(jù)顆粒密度和大小差異,低速去除大顆粒,高速獲得微粒組分。
利用高速離心使DNA或RNA與雜質(zhì)分層,清洗后沉淀。
離心力確保核酸聚集并貼附于管底。
蛋白沉淀依賴(lài)于離心加速度與緩沖體系密度。
適當(dāng)控制溫度與轉(zhuǎn)速,可保持蛋白活性。
在 8,000 – 12,000 rpm 條件下,細(xì)胞迅速聚集成緊密沉淀,便于后續(xù)裂解與提取。
描述顆粒沉降能力的參數(shù):
s = v / (ω2 r)
單位為 Svedberg(S,1 S = 10?13 s)。
顆粒越大或密度越高,沉降系數(shù)越大。
在梯度離心中,不同 s 值的顆粒在梯度介質(zhì)中停留于各自平衡位置,形成穩(wěn)定界面。
Legend Micro 17R 通過(guò)恒速控制,使界面清晰分布。
離心時(shí)間與沉降距離呈線性關(guān)系:
t = (ln r? – ln r?) / (s ω2)
合理設(shè)置時(shí)間可防止顆粒沉降過(guò)頭或重新懸浮。
高速旋轉(zhuǎn)會(huì)產(chǎn)生摩擦熱,使腔體溫度升高。
溫度升高會(huì)導(dǎo)致:
樣品黏度下降、離心速率變化;
生物分子失活。
Legend Micro 17R 采用以下溫控原理:
壓縮機(jī)制冷 —— 吸收腔體熱量;
熱傳導(dǎo)平衡 —— 金屬腔體快速散熱;
反饋調(diào)節(jié) —— 溫度傳感器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),PID 算法自動(dòng)控制。
通過(guò)此系統(tǒng),設(shè)備能在高速運(yùn)行中保持低溫恒穩(wěn),實(shí)現(xiàn)冷凍離心的“動(dòng)態(tài)平衡控制”。
轉(zhuǎn)子在高速旋轉(zhuǎn)時(shí),承受徑向拉應(yīng)力與切向應(yīng)力。
其安全設(shè)計(jì)依據(jù)公式:
σ = ρ ω2 (r?2 – r?2) / 2
為防止材料疲勞,轉(zhuǎn)子最大應(yīng)力不得超過(guò)材料屈服極限的 70%。
Legend Micro 17R 的鋁合金轉(zhuǎn)子經(jīng)過(guò)陽(yáng)極氧化與動(dòng)平衡測(cè)試,確保長(zhǎng)期高速使用的結(jié)構(gòu)安全。
制造過(guò)程中通過(guò)精密動(dòng)平衡儀校準(zhǔn)轉(zhuǎn)子質(zhì)量分布,使振動(dòng)幅度控制在 0.2 mm 以?xún)?nèi),確保高速運(yùn)轉(zhuǎn)穩(wěn)定。
樣品密度差不足:需引入梯度介質(zhì)增強(qiáng)分離。
液體過(guò)多或過(guò)少:樣品體積影響離心路徑與阻力。
轉(zhuǎn)子選擇不當(dāng):角度越小,沉降越集中;角度越大,分層更明顯。
樣品裝載不平衡:會(huì)引起振動(dòng)、離心力偏移。
溫度變化劇烈:改變介質(zhì)黏度,影響分層清晰度。
離心不僅限于生物樣品分離,其原理廣泛用于:
納米顆粒純化;
醫(yī)用血漿制備;
藥物載體分級(jí);
工業(yè)廢水中固液分離。
無(wú)論應(yīng)用領(lǐng)域如何變化,其核心仍是“密度差驅(qū)動(dòng)的加速沉降”,而 Legend Micro 17R 通過(guò)精密的控制系統(tǒng)將這一原理發(fā)揮到極致。
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