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質(zhì)保3年只換不修，廠家長(zhǎng)沙實(shí)了個(gè)驗(yàn)儀器制造有限公司

一、概述

伯樂(lè)電穿孔儀 165-2660 是一種高性能、高精度的電轉(zhuǎn)化設(shè)備，廣泛應(yīng)用于基因?qū)?、?xì)胞融合及分子遞送實(shí)驗(yàn)中。
該儀器通過(guò)高壓脈沖在細(xì)胞膜上產(chǎn)生瞬時(shí)可逆微孔，使外源 DNA、RNA 或蛋白質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。
在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，操作的規(guī)范性直接決定實(shí)驗(yàn)結(jié)果的成功率與重復(fù)性。

電穿孔操作看似簡(jiǎn)潔，實(shí)則對(duì)參數(shù)設(shè)置、樣品處理和操作順序要求極高。
正確掌握操作要點(diǎn)不僅能提高轉(zhuǎn)化效率，還能有效避免電弧、設(shè)備損壞或樣品死亡。

二、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備要點(diǎn)

1. 環(huán)境準(zhǔn)備

• 實(shí)驗(yàn)環(huán)境需保持干燥、整潔、無(wú)粉塵。

• 電源應(yīng)為獨(dú)立接地插座，電壓 220V ±10%，頻率 50/60Hz。

• 工作臺(tái)表面平整、防震，遠(yuǎn)離高壓設(shè)備及金屬導(dǎo)體。

• 環(huán)境溫度控制在 20–25℃，相對(duì)濕度 ≤80%。

• 電穿孔操作應(yīng)在生物安全柜或潔凈區(qū)域內(nèi)完成，以防污染。

2. 設(shè)備檢查

在開(kāi)機(jī)前，必須進(jìn)行以下檢查：

1. 電源線及接地線完好，無(wú)破損。

2. ShockPod 電擊槽內(nèi)干燥、無(wú)液體殘留。

3. 電擊杯清潔無(wú)裂紋，電極表面光滑。

4. 模塊連接牢固，顯示屏完好。

5. 打開(kāi)電源后自檢正常，屏幕顯示“READY”方可操作。

若發(fā)現(xiàn)異常（如錯(cuò)誤代碼、風(fēng)扇停轉(zhuǎn)、界面無(wú)響應(yīng)），應(yīng)立即停止使用并排查。

3. 樣品準(zhǔn)備

1. 選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，確?；钚愿?、狀態(tài)健康。

2. 用低鹽緩沖液洗滌 2–3 次，去除培養(yǎng)基中的離子。

3. 調(diào)整細(xì)胞濃度：

• 細(xì)菌：1×10? cells/mL；

• 酵母：1×10? cells/mL；

• 哺乳動(dòng)物細(xì)胞：1×10?–1×10? cells/mL。

4. 加入 DNA/RNA 溶液后輕輕混勻，避免劇烈振蕩。

5. 預(yù)冷樣品與電擊杯 5 分鐘，降低熱損傷。

三、開(kāi)機(jī)與系統(tǒng)初始化

1. 打開(kāi)電源開(kāi)關(guān)，等待系統(tǒng)自檢完成。

2. 檢查液晶屏顯示是否正常，確認(rèn)系統(tǒng)進(jìn)入主界面。

3. 若使用 CE 或 PC 模塊，確認(rèn)儀器識(shí)別成功。

4. 進(jìn)入所需操作模式：

• Preset Protocol（預(yù)設(shè)程序）：選擇系統(tǒng)默認(rèn)細(xì)胞類型參數(shù)；

• Manual Setup（手動(dòng)模式）：自行設(shè)置參數(shù)；

• User Program（用戶程序）：加載已保存的實(shí)驗(yàn)方案。

四、參數(shù)設(shè)置要點(diǎn)

1. 電壓設(shè)定

• 電壓決定電場(chǎng)強(qiáng)度，是影響穿孔效果的核心參數(shù)。

• 典型范圍：10–3000 V。

• 推薦范圍：

• 細(xì)菌：1800–2500 V；

• 酵母：1000–1500 V；

• 哺乳動(dòng)物細(xì)胞：300–800 V。

設(shè)定電壓時(shí)應(yīng)與電擊杯間隙匹配（0.1/0.2/0.4 cm），保持適當(dāng)電場(chǎng)強(qiáng)度。

2. 電容與電阻

• 電容范圍：25–3275 μF，可調(diào)節(jié)能量釋放速率；

• 電阻范圍：50–1000 Ω 或 ∞（開(kāi)路）。

時(shí)間常數(shù) τ = R × C，用于評(píng)估電壓衰減速度。
常見(jiàn)時(shí)間常數(shù)值為 4–7 ms（細(xì)菌）或 2–5 ms（真核細(xì)胞）。

3. 波形選擇

• 指數(shù)衰減波（Exponential Decay）：適合細(xì)菌、酵母、植物原生質(zhì)體；

• 方波（Square Wave）：適合哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

4. 脈沖時(shí)間與次數(shù)

方波模式下可設(shè)置單次脈沖時(shí)間（0.05–10 ms）與次數(shù)（1–10 次）。
多脈沖模式對(duì)細(xì)胞損傷小，適合敏感細(xì)胞。

5. 保存與調(diào)用

設(shè)定完成后按“ENTER”確認(rèn)，可通過(guò)“SAVE”保存參數(shù)組，方便下次調(diào)用。

五、裝樣與放電操作要點(diǎn)

1. 樣品裝入

1. 將 100–400 μL 樣品加入電擊杯。

2. 輕敲杯壁排除氣泡，保持液面平整。

3. 確認(rèn)液體不溢出杯口。

4. 將電擊杯放入 ShockPod 槽內(nèi)，確保與電極完全接觸。

2. 安全檢測(cè)

蓋上 ShockPod 上蓋，儀器自動(dòng)檢測(cè)閉鎖狀態(tài)。
若未閉合，屏幕提示“ERR01：蓋未閉合”。

3. 放電步驟

1. 按“PULSE”鍵進(jìn)入充電狀態(tài)，屏幕顯示“CHARGING”。

2. 當(dāng)提示“READY TO PULSE”時(shí)，按“ENTER”執(zhí)行放電。

3. 放電瞬間完成，儀器自動(dòng)顯示輸出電壓、時(shí)間常數(shù)、能量釋放百分比。

4. 待屏幕顯示“COMPLETE”后，方可取出電擊杯。

4. 放電過(guò)程注意事項(xiàng)

• 放電時(shí)嚴(yán)禁觸碰儀器和電擊槽；

• 不可打開(kāi)上蓋或移動(dòng)樣品；

• 若出現(xiàn)閃光或異常聲響，應(yīng)立即停止實(shí)驗(yàn)；

• 不得連續(xù)高壓放電超過(guò) 10 次，防止溫度過(guò)高。

六、樣品回收與后處理

1. 放電完成后，使用無(wú)菌移液器立即將樣品轉(zhuǎn)移至恢復(fù)培養(yǎng)基中。

2. 對(duì)細(xì)菌樣品，恢復(fù)時(shí)間一般為 30 min；哺乳動(dòng)物細(xì)胞為 1–2 h。

3. 電擊杯應(yīng)用去離子水清洗后晾干備用。

4. 若出現(xiàn)液體溢出，應(yīng)使用無(wú)塵紙擦拭 ShockPod 內(nèi)壁。

七、數(shù)據(jù)讀取與記錄要點(diǎn)

伯樂(lè)電穿孔儀 165-2660 自動(dòng)顯示以下數(shù)據(jù)：

• 輸出電壓（V）

• 時(shí)間常數(shù)（τ）

• 樣品電阻（Ω）

• 能量釋放百分比（%）

• 波形類型與脈沖次數(shù)

這些數(shù)據(jù)應(yīng)記錄在實(shí)驗(yàn)日志中，形成可追溯文件。

數(shù)據(jù)導(dǎo)出步驟：

1. 插入 USB 存儲(chǔ)設(shè)備；

2. 進(jìn)入菜單 “Data Export”；

3. 選擇文件格式（CSV 或 TXT）；

4. 導(dǎo)出并保存至計(jì)算機(jī)。

八、常見(jiàn)操作誤區(qū)與防范要點(diǎn)

九、安全操作要點(diǎn)

1. 操作者需經(jīng)過(guò)高壓設(shè)備使用培訓(xùn)。

2. 放電時(shí)嚴(yán)禁觸摸電擊槽與電極部分。

3. 保持設(shè)備干燥，避免液體進(jìn)入內(nèi)部。

4. 不得使用金屬鑷子接觸電擊杯電極。

5. 每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，關(guān)閉電源并拔掉電源線。

6. 若出現(xiàn)異味或煙霧，立即切斷電源。

7. 不得擅自拆機(jī)或改裝。

十、實(shí)驗(yàn)優(yōu)化要點(diǎn)

1. 電壓優(yōu)化

采用逐級(jí)提升法，觀察轉(zhuǎn)化率與存活率，找到最佳平衡點(diǎn)。

2. 緩沖液優(yōu)化

使用低離子強(qiáng)度緩沖液，如無(wú)鈣無(wú)鎂 PBS 或?qū)Ｓ?electroporation buffer，可顯著減少電弧。

3. 溫度控制

在冰上操作并保持樣品低溫，防止過(guò)熱導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

4. 細(xì)胞濃度調(diào)整

保持合適濃度，避免團(tuán)聚或電流過(guò)大。

5. 電擊杯選擇

不同間隙對(duì)應(yīng)不同電場(chǎng)強(qiáng)度，應(yīng)根據(jù)細(xì)胞體積選擇合適型號(hào)。

6. 多脈沖策略

對(duì)于真核細(xì)胞，可使用 2–3 次低電壓脈沖提高導(dǎo)入效率。

十一、實(shí)驗(yàn)后清理與維護(hù)要點(diǎn)

1. 關(guān)閉電源，等待 10 秒以釋放殘余電荷。

2. 清潔 ShockPod 槽，用干布擦拭，保持干燥。

3. 電擊杯用去離子水沖洗三次并晾干。

4. 外殼用無(wú)水乙醇或濕布輕拭，避免使用腐蝕性溶劑。

5. 每月檢查通風(fēng)口與風(fēng)扇是否正常運(yùn)轉(zhuǎn)。

6. 每三個(gè)月進(jìn)行一次電壓校準(zhǔn)。

7. 長(zhǎng)期不使用時(shí)，覆蓋防塵罩并置于干燥環(huán)境中。

十二、效率提升與質(zhì)量控制要點(diǎn)

1. 重復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：相同參數(shù)重復(fù) 3 次，結(jié)果差異 ≤10% 為合格。

2. 記錄制度：保存電壓、電容、時(shí)間常數(shù)等關(guān)鍵參數(shù)。

3. 對(duì)照實(shí)驗(yàn)：每批實(shí)驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照（無(wú) DNA）與陽(yáng)性對(duì)照（已驗(yàn)證條件）。

4. 數(shù)據(jù)分析：繪制電壓—效率曲線或時(shí)間常數(shù)分布圖，尋找最佳參數(shù)區(qū)。

5. 設(shè)備監(jiān)控：定期導(dǎo)出系統(tǒng)日志，查看放電記錄。

十三、常見(jiàn)問(wèn)題與排查要點(diǎn)

十四、操作流程總結(jié)

1. 檢查儀器與環(huán)境 → 確認(rèn)電源、蓋鎖、接口安全。

2. 準(zhǔn)備樣品 → 細(xì)胞狀態(tài)良好，使用低鹽緩沖液。

3. 設(shè)置參數(shù) → 選擇合適電壓、波形與電容。

4. 加樣與放電 → 排氣泡，蓋緊上蓋，執(zhí)行脈沖。

5. 數(shù)據(jù)記錄 → 保存實(shí)驗(yàn)參數(shù)與結(jié)果。

6. 樣品恢復(fù) → 立即加入培養(yǎng)基恢復(fù)。

7. 設(shè)備清理 → 斷電、清潔、晾干、覆蓋防塵罩。