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質(zhì)保3年只換不修，廠家長沙實(shí)了個驗(yàn)儀器制造有限公司

一、儀器簡介

伯樂電穿孔儀 165-2661 是一款新一代高性能電轉(zhuǎn)化儀器，用于基因?qū)?、?xì)胞轉(zhuǎn)染、蛋白質(zhì)傳遞以及藥物遞送等生物實(shí)驗(yàn)。
該設(shè)備基于電穿孔原理，通過短時間高壓脈沖在細(xì)胞膜上產(chǎn)生可逆性微孔，使外源分子能夠穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。

165-2661 型號在前代 165-2660 的基礎(chǔ)上進(jìn)行了系統(tǒng)升級：

• 電壓控制更精確；

• 輸出波形更穩(wěn)定；

• 數(shù)據(jù)存儲容量更大；

• 安全保護(hù)系統(tǒng)更加完善。

該儀器廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、細(xì)胞工程、醫(yī)學(xué)基因研究及生物制藥開發(fā)等領(lǐng)域，是科研和教學(xué)中不可或缺的核心設(shè)備之一。

二、技術(shù)參數(shù)

三、結(jié)構(gòu)組成

伯樂電穿孔儀 165-2661 采用模塊化設(shè)計，主要由以下部分構(gòu)成：

1. 主機(jī)系統(tǒng)

包括高壓電源、能量儲存電容、波形控制電路、主控芯片和散熱模塊，是整機(jī)的能量與控制核心。

2. ShockPod 電擊槽

用于放置電擊杯，是電能傳遞與放電的執(zhí)行部件。ShockPod 內(nèi)置安全蓋鎖檢測裝置，可防止未鎖閉時放電。

3. 模塊接口區(qū)

后部設(shè)有模塊插槽，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求插入 CE（電容擴(kuò)展）或 PC（脈沖控制）模塊。

4. 操作界面

前面板設(shè)有 LCD 顯示屏與按鍵區(qū)，包括：

• MENU：主菜單；

• ENTER：確認(rèn)操作；

• SAVE：存儲參數(shù)；

• PULSE：執(zhí)行放電；

• 方向鍵：調(diào)整參數(shù)值。

5. 安全保護(hù)系統(tǒng)

包含過壓保護(hù)、溫控保護(hù)、自動放電、蓋鎖檢測與短路保護(hù)等功能，確保實(shí)驗(yàn)安全可靠。

四、工作原理

電穿孔過程的基本原理為：

1. 在細(xì)胞懸液中施加高壓電場，使膜電位達(dá)到臨界值；

2. 膜結(jié)構(gòu)發(fā)生暫時性重排，形成納米級可逆孔；

3. 外源 DNA、RNA 或蛋白質(zhì)分子在電場作用下穿過膜孔進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)；

4. 電場解除后，細(xì)胞膜在數(shù)秒內(nèi)恢復(fù)完整性。

165-2661 的高精度脈沖控制系統(tǒng)可在毫秒級時間內(nèi)實(shí)現(xiàn)能量釋放與電壓衰減，使穿孔效果穩(wěn)定且細(xì)胞存活率高。

五、安裝與開機(jī)步驟

1. 安裝環(huán)境要求

• 放置于干燥、平整、防震的實(shí)驗(yàn)臺；

• 避免陽光直射與強(qiáng)磁場干擾；

• 環(huán)境溫度 20–25℃，濕度 40–60%；

• 預(yù)留通風(fēng)空間≥10 cm。

2. 接線檢查

• 插好電源線并接地；

• 檢查 ShockPod 是否干燥；

• 確認(rèn)模塊接口連接牢固。

3. 開機(jī)操作

• 打開電源開關(guān)；

• 系統(tǒng)自動執(zhí)行自檢（檢測溫度、蓋鎖、電壓模塊等）；

• 自檢通過后屏幕顯示“READY”即進(jìn)入主界面。

六、操作流程

（一）樣品準(zhǔn)備

1. 細(xì)胞處理：
   使用對數(shù)生長期細(xì)胞，洗滌 2–3 次以去除鹽離子；
   以低離子緩沖液（如 1 mM HEPES）重懸。

2. 樣品濃度：

• 細(xì)菌：1×10? cells/mL；

• 酵母：1×10? cells/mL；

• 哺乳動物細(xì)胞：1×10?–1×10? cells/mL。

3. 樣品混合：
   加入外源 DNA/RNA 并輕輕混勻，冰上預(yù)冷 5 分鐘。

（二）參數(shù)設(shè)置

按“MENU”進(jìn)入設(shè)置界面，依次設(shè)定：

1. 電壓（Voltage）：10–3500 V；

2. 電容（Capacitance）：25–3275 μF；

3. 電阻（Resistance）：50–1000 Ω 或 ∞；

4. 波形類型（Waveform）：指數(shù)衰減波或方波；

5. 脈沖次數(shù)（Pulse Count）：1–10 次。

系統(tǒng)自動計算時間常數(shù)（τ），并顯示預(yù)估能量。
設(shè)置完成后按“ENTER”確認(rèn)。

（三）電擊操作

1. 向電擊杯中加入 80% 容積的樣品（約 0.8 mL）；

2. 輕輕敲擊杯壁排除氣泡；

3. 將電擊杯放入 ShockPod，關(guān)閉上蓋并確認(rèn)“咔噠”聲；

4. 屏幕提示“LID CLOSED – SAFE TO RUN”；

5. 按“PULSE”鍵開始充電；

6. 當(dāng)提示“READY TO PULSE”時按“ENTER”放電；

7. 放電結(jié)束后屏幕顯示電壓、時間常數(shù)、能量比例等結(jié)果；

8. 屏幕出現(xiàn)“COMPLETE”后方可開蓋。

（四）樣品回收

放電后立即將樣品取出并轉(zhuǎn)入恢復(fù)培養(yǎng)基中：

• 細(xì)菌樣品 37℃ 復(fù)蘇 30 分鐘；

• 酵母樣品 30℃ 復(fù)蘇 60 分鐘；

• 哺乳動物細(xì)胞 37℃ 復(fù)蘇 1–2 小時。

復(fù)蘇后進(jìn)行轉(zhuǎn)化篩選或后續(xù)培養(yǎng)。

七、安全注意事項(xiàng)

1. 放電操作前必須確認(rèn)蓋鎖閉合；

2. 放電時嚴(yán)禁觸摸儀器與電擊杯；

3. 不可使用含鹽緩沖液；

4. 實(shí)驗(yàn)間隔不少于 10 秒；

5. 放電后等待 5 秒再開蓋；

6. 操作人員需佩戴絕緣手套；

7. 禁止私自拆卸主機(jī)或模塊；

8. 若出現(xiàn)異味或閃光，應(yīng)立即斷電。

八、數(shù)據(jù)記錄與導(dǎo)出

165-2661 具備自動數(shù)據(jù)存儲功能，每次實(shí)驗(yàn)完成后可自動保存參數(shù)與結(jié)果。

導(dǎo)出步驟：

1. 插入 USB 存儲設(shè)備；

2. 進(jìn)入菜單“Data Export”；

3. 選擇文件格式（CSV 或 TXT）；

4. 系統(tǒng)自動生成文件，便于數(shù)據(jù)分析與歸檔。

九、常見問題及排除

十、維護(hù)與保養(yǎng)

1. 每次實(shí)驗(yàn)后清潔電擊杯與 ShockPod；

2. 使用無水乙醇擦拭外殼，保持干燥；

3. 每周檢查電源線、接地線及風(fēng)扇；

4. 每月檢測輸出電壓與時間常數(shù)誤差；

5. 每年由專業(yè)人員進(jìn)行系統(tǒng)校準(zhǔn)與固件升級。

注意：ShockPod 內(nèi)部必須保持干燥，任何液體進(jìn)入都可能導(dǎo)致短路或電弧放電。

十一、存放與運(yùn)輸

• 存放溫度：10–30℃，濕度：30–60%；

• 環(huán)境應(yīng)干燥通風(fēng)，無腐蝕性氣體；

• 長期停用時斷開電源，覆蓋防塵罩；

• 每月開機(jī)運(yùn)行 5 分鐘保持系統(tǒng)穩(wěn)定；

• 運(yùn)輸時使用原包裝箱并避免劇烈震動。

十二、實(shí)驗(yàn)優(yōu)化建議

1. 選擇適當(dāng)電場強(qiáng)度：
   電場強(qiáng)度 (E=V/d) 應(yīng)控制在細(xì)胞類型允許范圍內(nèi)。

• 細(xì)菌：10–12 kV/cm；

• 酵母：6–8 kV/cm；

• 哺乳動物細(xì)胞：1–3 kV/cm。

2. 波形選擇：

• 指數(shù)衰減波適合細(xì)菌、酵母；

• 方波適合哺乳動物細(xì)胞。

3. 時間常數(shù)控制：
   一般保持在 4–8 ms 范圍可獲得高導(dǎo)入率與良好存活率。

4. 緩沖液優(yōu)化：
   使用低導(dǎo)電 buffer，可顯著減少電弧風(fēng)險。

5. 溫度控制：
   電擊前預(yù)冷樣品與電擊杯，減小熱效應(yīng)。

6. 多脈沖模式：
   對敏感細(xì)胞可采用低電壓多次放電方式，提升導(dǎo)入效率并降低損傷。

十三、應(yīng)用范圍

伯樂電穿孔儀 165-2661 適用于以下實(shí)驗(yàn)：

• 質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)化與基因克??；

• 真核細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定表達(dá)；

• CRISPR/Cas9 系統(tǒng)導(dǎo)入；

• RNA 或蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)；

• 植物原生質(zhì)體與藻類基因?qū)耄?/span>

• 藥物與納米材料細(xì)胞遞送研究。

十四、性能驗(yàn)證與校準(zhǔn)

每半年應(yīng)進(jìn)行一次性能驗(yàn)證。

1. 輸出電壓校準(zhǔn)：
   用高壓探針測量實(shí)際電壓，誤差 ≤ ±2%。

2. 時間常數(shù)測試：
   使用標(biāo)準(zhǔn)電阻與電容模擬樣品測量 τ，誤差 ≤ ±0.05 ms。

3. 波形監(jiān)測：
   外接示波器，波形應(yīng)平滑無突變。

4. 安全系統(tǒng)檢測：
   檢查蓋鎖、過壓、過溫保護(hù)均應(yīng)正常響應(yīng)。

十五、年度維護(hù)計劃

十六、實(shí)驗(yàn)記錄模板

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)存檔保存，以便追溯與重復(fù)驗(yàn)證。

十七、安全提示

• 電擊過程中嚴(yán)禁操作蓋鎖或插拔模塊；

• 不得在潮濕環(huán)境下運(yùn)行儀器；

• 若發(fā)生短路、煙霧或異味，應(yīng)立即斷電；

• 禁止未經(jīng)授權(quán)人員自行維修；

• 實(shí)驗(yàn)區(qū)域應(yīng)遠(yuǎn)離液體容器與金屬器具。