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本儀器基于電穿孔原理，通過在短時間內(nèi)對樣品施加高壓脈沖，使細(xì)胞膜形成瞬時微孔，從而允許外源 DNA、RNA、蛋白質(zhì)或納米顆粒進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。165-2661 型在結(jié)構(gòu)、控制、數(shù)據(jù)記錄等方面具有高精度、可重復(fù)性和綜合安全保障。
實驗步驟可細(xì)分為：樣品準(zhǔn)備、儀器設(shè)置、電擊執(zhí)行、樣品回收與培養(yǎng)、結(jié)果評估。每一環(huán)節(jié)均有其關(guān)鍵要點和注意事項。
將儀器安放于平整、干燥、無強(qiáng)振動、無直射陽光的實驗臺上。
接通電源，確認(rèn) AC 220 V ± 10%，50/60 Hz，且插座已接地。
開機(jī)后儀器進(jìn)行自檢，確認(rèn)蓋鎖檢測、溫度傳感、自動放電系統(tǒng)、風(fēng)扇散熱系統(tǒng)均正常。
檢查電擊槽（ShockPod）內(nèi)部是否干燥、無殘液、無沉淀物。電擊杯是否清潔、干燥、無裂紋或氧化。
準(zhǔn)備電擊杯、緩沖液、樣品、外源分子、刻度移液器等。確保所有耗材無鹽、無離子強(qiáng)度過高。
預(yù)設(shè)培養(yǎng)環(huán)境。若用哺乳動物細(xì)胞，預(yù)熱培養(yǎng)基至 37 ℃；若用細(xì)菌或酵母，準(zhǔn)備適宜轉(zhuǎn)化/培養(yǎng)平板。
從周期培養(yǎng)或適宜狀態(tài)下取細(xì)胞：細(xì)菌為對數(shù)生長期，酵母或真核細(xì)胞亦處于對數(shù)期。
離心、洗滌多次以去除培養(yǎng)基中高鹽成分，使用低離子緩沖液或純水重懸。
樣品濃度調(diào)整至推薦范圍：例如細(xì)菌約 1×10? cells/mL，真核細(xì)胞約 1×10?–1×10? cells/mL。
外源分子（DNA、RNA、蛋白）應(yīng)純度高、無鹽，并緩慢加入樣品中，輕柔混勻。
將混合樣品置于冰上或低溫條件（通常 0-4 ℃）預(yù)冷 5-10 分鐘，以減少熱效應(yīng)。
移液至電擊杯，體積一般為電擊杯最大容積的 60-80%。避免液面高于電極上緣或產(chǎn)生氣泡。
在主界面按“MENU（菜單）”鍵進(jìn)入設(shè)置模塊。
選擇“Manual Setup（手動設(shè)置）”或“Preset Protocol（預(yù)設(shè)方案）”視實驗需要。
以下是常規(guī)需設(shè)定的參數(shù)：
電壓 (Voltage)：例如 400-700 V（真核細(xì)胞）、1200-1600 V（酵母）、2000-2500 V（細(xì)菌）等。
電容 (Capacitance)：例如 25-500 μF 細(xì)菌體系、小電容；500-1000 μF 真核或植物體系。
電阻 (Resistance)：根據(jù)樣品電導(dǎo)率設(shè)定，一般 50-600 Ω。如儀器具自動匹配 “Auto-R” 選項可啟用。
波形類型 (Waveform)：選擇指數(shù)衰減波（Exponential）或方波（Square）模式，依據(jù)細(xì)胞類型與目的。
脈沖次數(shù) (Pulse Count)：可設(shè) 1-10 次。敏感細(xì)胞可用多脈沖，耐受細(xì)胞可用單脈沖。
間隔時間 (Pulse Interval)：多次脈沖間隔建議 0.5-2 s，視樣品耐受性而定。
保存參數(shù)方案：完成設(shè)定后按 “SAVE” 鍵保存當(dāng)前參數(shù)組，以便日后調(diào)用。
檢查設(shè)定的電壓是否在儀器允許范圍（10-3500 V）內(nèi)。
檢查電容與電阻組合是否合理，確保時間常數(shù)（τ = R × C）在適用范圍。
確認(rèn)電擊杯間隙、樣品體積、電導(dǎo)率等與設(shè)置參數(shù)匹配。
若使用梯度模式（Gradient Mode），設(shè)定起始電壓、步長、次數(shù)。
將預(yù)冷樣品轉(zhuǎn)移到電擊杯中，確認(rèn)無氣泡。
蓋上杯蓋并插入 ShockPod。
蓋鎖應(yīng)聽“咔噠”聲提示閉合成功，儀器顯示 “LID CLOSED – SAFE TO RUN”。
按 “PULSE” 鍵進(jìn)入充電狀態(tài)，儀器提示 “READY TO PULSE”。
按 “ENTER” 鍵執(zhí)行放電。
放電過程中，儀器自動顯示實際輸出電壓、時間常數(shù)、能量釋放比例等數(shù)據(jù)。
放電結(jié)束后，屏幕提示 “COMPLETE”，系統(tǒng)進(jìn)入冷卻或退出狀態(tài)。
放電結(jié)束后 5-10 秒再打開蓋子，避免電弧殘留。
將樣品立即轉(zhuǎn)入預(yù)熱培養(yǎng)基或平板中，輕輕混勻。
細(xì)菌樣品可立即置于適溫培養(yǎng)，哺乳動物細(xì)胞轉(zhuǎn)至 37 ℃ CO? 培養(yǎng)箱恢復(fù)。
記錄本次放電參數(shù)、樣品類型、體積、濃度、結(jié)果編號等，用于后續(xù)分析。
放電后立即加入適量預(yù)溫培養(yǎng)液（如 SOC、YPD 等），輕輕混勻。
在 37 ℃（細(xì)菌）或 30 ℃（酵母）溫育約 30-60 分鐘以允許細(xì)胞修復(fù)。
將適量樣品鋪平至選擇性培養(yǎng)平板，培養(yǎng)至菌落形成。
放電后轉(zhuǎn)入含血清完全培養(yǎng)基，置于 37 ℃、5% CO? 條件培養(yǎng)。
靜置 1-2 小時后可換培養(yǎng)基并繼續(xù)培養(yǎng)至預(yù)定時間點。
后續(xù)可進(jìn)行熒光標(biāo)記、Western blot、流式檢測等分析。
轉(zhuǎn)入含甘露醇保護(hù)劑或適用于原生質(zhì)體的培養(yǎng)液中恢復(fù)。
置于 25-28 ℃ 溫和光照條件下，時間約 1-2 小時。
后續(xù)用于轉(zhuǎn)基因表達(dá)、熒光觀察或下游分析。
儀器自動保存：實際輸出電壓、電阻、時間常數(shù)、能量釋放比例、波形圖。
可通過 USB 導(dǎo)出 CSV 或 TXT 文件，用于統(tǒng)計分析。
轉(zhuǎn)化/轉(zhuǎn)染效率：細(xì)菌以 CFU/μg DNA 表示；真核細(xì)胞以陽性細(xì)胞占比表示。
細(xì)胞存活率：通過臺盼藍(lán)、PI 染色或流式計數(shù)評估。
表達(dá)水平：如熒光蛋白表達(dá)、qPCR 或 Western blot 檢測。
重復(fù)性與穩(wěn)定性：三次以上實驗數(shù)據(jù)應(yīng)波動較?。ɡ缧首兓?<±15%）。
整理不同參數(shù)組合與實驗結(jié)果對應(yīng)關(guān)系。
繪制轉(zhuǎn)化效率-電壓、時間常數(shù)-存活率等曲線。
根據(jù)趨勢調(diào)整參數(shù)，進(jìn)入下一輪優(yōu)化。
實驗結(jié)束后關(guān)閉電源。
等待 10 秒自動放電后再打開蓋子。
用無水乙醇擦拭電擊杯、電極及 ShockPod 內(nèi)部，確保干燥。
清理通風(fēng)口和風(fēng)扇濾網(wǎng)，保持散熱通暢。
定期（每月／每季度）校驗輸出電壓、時間常數(shù)與波形穩(wěn)定性。
電擊前必須確認(rèn)蓋鎖閉合，嚴(yán)禁操作中觸摸電極。
樣品緩沖液不得含高鹽或氣泡，避免電弧發(fā)生。
實驗過程中應(yīng)佩戴絕緣手套。若出現(xiàn)閃光、冒煙、異常聲音，立即斷電。
實驗區(qū)域應(yīng)遠(yuǎn)離液體、金屬器具或未經(jīng)接地的物體。
操作后樣品應(yīng)及時回收并對廢液做高壓滅菌處理。
檢查儀器與環(huán)境；
準(zhǔn)備樣品（濃度、電導(dǎo)率、體積）；
設(shè)定儀器參數(shù)（電壓、電容、電阻、波形、脈沖次數(shù)）；
裝載電擊杯，檢測蓋鎖狀態(tài)；
執(zhí)行放電；
樣品轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)條件；
記錄數(shù)據(jù)與結(jié)果；
清理儀器，維護(hù)設(shè)備。
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